செய்திகள் - அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் மையவிலக்கு குழாயின் பயன்பாடு மற்றும் முன்னெச்சரிக்கைகள்

அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் மையவிலக்கு குழாயின் பயன்பாடு மற்றும் முன்னெச்சரிக்கைகள்

1) பொருத்தமான அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் குழாயைத் தேர்வு செய்யவும்.UF சவ்வுகள் பல்வேறு இரசாயனங்களுக்கு சகிப்புத்தன்மையின் மட்டத்தில் வேறுபடுகின்றன என்பதை நினைவில் கொள்க.பொதுவாக, 10 kDa மூலக்கூறு எடை கட்-ஆஃப் கொண்ட அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் குழாய்கள், 35 kDa போன்ற ஆர்வமுள்ள புரதத்தின் மூலக்கூறு எடையில் 1/3 ஐ விட அதிகமாக இருக்கக் கூடாது.ஆர்வமுள்ள புரதத்தின் மூலக்கூறு எடை சுமார் 10 kd ஆக இருந்தால், 3 KD இன் மூலக்கூறு எடை கட்-ஆஃப் கொண்ட அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் குழாயைப் பயன்படுத்தலாம்.

(2) அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன், புதிதாக வாங்கப்பட்டது, உலர்ந்தது, பயன்படுத்துவதற்கு முன் அல்ட்ராப்பூர் நீர் சேர்க்கப்பட்டு, சவ்வு வழியாக நீர் முழுவதுமாக அனுப்பப்படும், ஐஸ் குளியல் அல்லது குளிர்சாதன பெட்டி சில நிமிடங்களுக்கு முன் குளிர்விக்கப்படும்.பின்னர் தண்ணீர் ஊற்றப்படுகிறது, அதாவது புரத திரவம், மற்றும் எவ்வளவு சேர்க்கப்படுகிறது, குழாயின் மேற்புறத்தில் உள்ள வெள்ளைக் கோட்டை விட அதிகமாக இல்லை.செயல்பாடு இலகுவானது, புரதக் கரைசலைச் சேர்ப்பதற்கு முன் அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் குழாயை பனியில் குளிர வைக்க வேண்டும்.

3) நிறை மற்றும் ஈர்ப்பு மையம் இரண்டும் சமநிலையை அடைய வேண்டும்.சுழலும் வேகம் மற்றும் முடுக்கம் மிக வேகமாக இல்லை, இல்லையெனில் அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் சவ்வை நேரடியாக சேதப்படுத்தும்.மையவிலக்கு அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் தொடங்கப்பட்டது (மையவிலக்கு 4 டிகிரிக்கு முன்கூட்டியே குளிரூட்டப்பட்டது).வெவ்வேறு மையவிலக்குகளின் RPM ஆனது g ஆக மாற்றப்பட்ட பிறகு, அது வேறுபட்டது.மையவிலக்கின் முடுக்கம் குறைந்தபட்சமாக சரிசெய்யப்பட்டது, இது சவ்வு மீது அழுத்தத்தை குறைக்கிறது.கவனத்திற்கு, மையவிலக்கு அதன் இலக்கு வேகத்தை அடைந்த பிறகு மையவிலக்கை விட்டு வெளியேறுவதை உறுதிப்படுத்திக் கொள்ளுங்கள் அல்லது உங்களுக்கு ஏதேனும் சிக்கல் இருந்தால், அதை முதல் முறையாக உங்களால் கையாள முடியாது.சுழலுக்கான சவ்வின் நோக்குநிலை அறிவுறுத்தல்களின்படி சரிசெய்யப்பட்டது (கோண மையவிலக்கு வழக்கு என்பது அச்சுக்கு செங்குத்தாக சவ்வு).நடைமுறை பயன்பாட்டில், பொதுவான சுழற்சி வேகம் அறிவுறுத்தல்களில் இருப்பதை விட குறைவாக உள்ளது, இதனால் மையவிலக்கு குழாயின் ஆயுளை நீட்டிக்க முடியும்.

(4) மீதமுள்ள 1ml க்கு செறிவூட்டப்பட்டால், 50ul தாங்கல் கரைசலை எடுத்து, 10ul ஃப்ளோவைச் சேர்த்து, அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் குழாயில் புரதம் இல்லாததா எனத் தீர்ப்பாக, நீல நிறத்தில் ஏதேனும் உள்ளதா என்று பார்க்கவும்.குழாய் கசிந்தால், அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷனைத் தொடங்க, மேல் அடுக்கை மீண்டும் ஊற்றி, ஒரு புதிய குழாயில் ஓட்டவும்.குழாய்கள் தவறிவிட்டனவா என்பதைத் துல்லியமாகத் தீர்மானிக்க, 10 நிமிடங்களுக்கு 5mgml BSA உடன் ப்ளோத்ரூ, புரோட்டீன் பசை அல்லது பிராட்ஃபோர்ட் கச்சா மதிப்பீட்டில் இயங்கி, மீதமுள்ள செறிவூட்டப்பட்ட புரதக் கரைசலைச் சேர்ப்பதன் மூலம் தொடரவும். அனைத்து செறிவு சேர்க்கப்பட்டது.புரோட்டீன்களின் மழைப்பொழிவு ஏற்பட்டால், குழாய் மூடலுக்கு வழிவகுத்தால், மையவிலக்கலின் போது கவனமாக இருங்கள்.மழைப்பொழிவு ஏற்பட்டால், மழைப்பொழிவுக்கான குறிப்பிட்ட காரணம் அதிகப்படியான புரதச் செறிவா அல்லது பொருத்தமற்ற இடையகமா என்பதைத் தீர்மானிக்கவும்;முந்தையதை ஒரே நேரத்தில் பல அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் குழாய்களின் அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் மூலம் தீர்க்க முடியும், செறிவு குறைகிறது, மற்றும் பிந்தையது புரதத்தின் மழைப்பொழிவு ஏற்படாத வரை வெவ்வேறு இடையக தீர்வுகளை பரிமாறிக்கொள்வதன் மூலம் தீர்க்கப்படும்.

(5) புரதத்தை செறிவூட்டுவதற்கு முதல் சில படிகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, மேலும் இடையகத்தை மாற்ற வேண்டும் என்றால், மெதுவாக புதிய இடையகத்தை (0.22um அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் சவ்வு மூலம் அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன்) மொத்த புரதத்தில் சுமார் 1 மில்லிக்கு சேர்த்து, மூன்றிற்கு சுமார் 1 மில்லிக்கு மீண்டும் செறிவூட்டவும். தொடர்ச்சியான முறை, விரும்பிய புரதச் செறிவைப் பொறுத்து இறுதி செறிவூட்டப்பட்ட இறுதித் தொகுதியுடன், பொதுவாக 500ulக்கு மேல் இல்லை, ஆனால் 200ulக்குள் இருக்கும்.ஒவ்வொரு முறையும் குறைந்தபட்சம் 10 × அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட தொகுதி செறிவூட்டல் மூலம் கணக்கிடப்படும் போது, மூன்று முறை 1000 × அல்லது அதற்கு மேற்பட்டவற்றை அடையலாம்.

(5) புரதத்தை செறிவூட்ட முதல் சில படிகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, மேலும் இடையகத்தை மாற்ற வேண்டும் என்றால், மெதுவாக புதிய இடையகத்தை (0.22um அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் சவ்வு மூலம் அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன்) மொத்த புரதத்தின் சுமார் 1 மில்லிக்கு சேர்த்து, மூன்றிற்கு சுமார் 1 மில்லிக்கு மீண்டும் செறிவூட்டவும். தொடர்ச்சியான முறை, விரும்பிய புரதச் செறிவைப் பொறுத்து இறுதி செறிவூட்டப்பட்ட இறுதித் தொகுதியுடன், பொதுவாக 500ulக்கு மேல் இல்லை, ஆனால் 200ulக்குள் இருக்கும்.ஒவ்வொரு முறையும் குறைந்தபட்சம் 10 × அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட அளவு செறிவூட்டல் மூலம் கணக்கிடப்படும் போது, மூன்று முறை 1000 × அல்லது அதற்கும் அதிகமாக, இடையக மாற்றத்தைப் பெறுங்கள்.

இடுகை நேரம்: நவம்பர்-09-2022