PCR சோதனைகளில் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் பல நொதிகள்

பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை, சுருக்கமாகபிசிஆர்ஆங்கிலத்தில், குறிப்பிட்ட DNA துண்டுகளை பெருக்கப் பயன்படும் ஒரு மூலக்கூறு உயிரியல் நுட்பமாகும்.இது உடலுக்கு வெளியே ஒரு சிறப்பு டிஎன்ஏ பிரதியெடுப்பாகக் கருதப்படலாம், இது டிஎன்ஏவின் மிகச் சிறிய அளவை பெரிதும் அதிகரிக்கலாம்.முழு நேரத்திலும்பிசிஆர்எதிர்வினை செயல்முறை, ஒரு வகை பொருட்கள் முக்கிய பங்கு வகிக்கிறது - நொதிகள்.

1. டாக் டிஎன்ஏ

ஆரம்ப நாட்களில் சோதனைகளில்பிசிஆர், விஞ்ஞானிகள் Escherichia coli DNA பாலிமரேஸ் I ஐப் பயன்படுத்தினர், ஆனால் இந்த நொதியில் சிக்கல் உள்ளது: ஒவ்வொரு முறை சுழற்சியின் போதும் புதிய நொதியை நிரப்ப வேண்டும், இது செயல்பாட்டின் படிகளை சற்று சிக்கலாக்குகிறது மற்றும் முழுமையாக தானாக பெருக்குவது கடினம்.1988 ஆம் ஆண்டு தெர்மஸ் அக்வாடிகஸிலிருந்து தற்செயலாக Taq DNA பாலிமரேஸை விஞ்ஞானிகள் தனிமைப்படுத்திய பிறகு இந்தப் பிரச்சனை தீர்க்கப்பட்டது. அதன் பின்னர் டிஎன்ஏவின் தானியங்கி பெருக்கம் உண்மையாகிவிட்டது.இந்த நொதியின் கண்டுபிடிப்பும் செய்கிறதுபிசிஆர்தொழில்நுட்பம் ஒரு வசதியான, நடைமுறை மற்றும் உலகளாவிய தொழில்நுட்பம்.தற்போது, ​​டிஎன்ஏ கருவிகளில் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் மிகவும் பொதுவான பாலிமரேஸ் ஆகும்.

2. PfuDNA

மேலே குறிப்பிட்டுள்ளபடி, Taq DNase இல் ஒரு பெரிய பிழை உள்ளது, எனவே விஞ்ஞானிகள் ஒரு குறிப்பிட்ட அளவிற்கு Taq DNA பாலிமரேஸை மாற்றியமைத்துள்ளனர், இது பொருந்தாத காரணத்தால் குறிப்பிடப்படாத பெருக்கத்தைத் தவிர்க்கிறது, இதன் விளைவாக தவறான சோதனை முடிவுகள் வந்துள்ளன.ஆனால் Taq DNA பாலிமரேஸின் மாற்றம் அறை வெப்பநிலையில் DNA பாலிமரேஸின் செயல்பாட்டைத் தடுக்கலாம்.டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸின் மேற்கூறிய குறைபாடுகளை PfuDNA பாலிமரேஸ் நன்கு ஈடுசெய்ய முடியும், இதனால் PCR எதிர்வினை சாதாரணமாக மேற்கொள்ளப்படும், மேலும் இலக்கு மரபணு பெருக்கத்தின் வெற்றி விகிதத்தை திறம்பட மேம்படுத்த முடியும்.

3. தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ்

தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் 1970 இல் கண்டுபிடிக்கப்பட்டது. இந்த நொதி ஆர்என்ஏவை ஒரு டெம்ப்ளேட்டாகவும், டிஎன்டிபியை அடி மூலக்கூறாகவும் பயன்படுத்துகிறது, அடிப்படை இணைத்தல் கொள்கையைப் பின்பற்றுகிறது, மேலும் 5′-3′ திசையில் ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட்டிற்கு இணையான டிஎன்ஏ ஒற்றை இழையை ஒருங்கிணைக்கிறது.தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட்களில் இருந்து டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் செயல்பாட்டைச் சார்ந்தது, எனவே 3′-5′ எக்ஸோநியூக்லீஸ் செயல்பாடு இல்லை.இருப்பினும், இது RNase H செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது, இது தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸின் தொகுப்பு நீளத்தை ஒரு குறிப்பிட்ட அளவிற்கு கட்டுப்படுத்துகிறது.வைல்ட் ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸின் குறைந்த நம்பகத்தன்மை மற்றும் தெர்மோஸ்டபிலிட்டி காரணமாக, விஞ்ஞானிகள் அதை மாற்றியமைத்தனர்.

க்குபிசிஆர்சோதனைகள், முக்கிய நுகர்பொருட்கள்: தனிப்பட்ட PCR குழாய், 4/8-துண்டு PCR குழாய், PCR தட்டுகள்.

லேபியோவின்PCR நுகர்பொருட்கள்பின்வருபவை வேண்டும்நன்மைகள்:

பிசிஆர் தட்டுகள்: பரந்த வெப்ப சைக்கிள் பொருந்தக்கூடிய தன்மை;உயர்-மாறுபாடு, எளிதாக நன்கு அடையாளம் காணுதல்;நன்கு ஒளிரும் பிரதிபலிப்பு;நல்லதுவெப்ப பரிமாற்றம்;சான்றளிக்கப்பட்ட DNase, RNase, DNA, PCR தடுப்பான்கள் மற்றும் பைரோஜன் இல்லாத சோதனை.

தனிப்பட்ட PCR குழாய்கள்: ஆவியாதல்-எதிர்ப்பு; நல்லதுவெப்ப பரிமாற்றம்;சிறந்த ஒளியியல் தெளிவு; சான்றளிக்கப்பட்ட DNase, RNase, DNA, PCR தடுப்பான்கள் மற்றும் பைரோஜன் இல்லாத சோதனை.

4/8-கீற்றுகள் PCR குழாய்கள்: மிக மெல்லிய சுவர்கள், அதிக தெளிவு, நல்ல ஒளிரும் பிரதிபலிப்பு;மருந்துத் தொழில், உணவுத் தொழில் மற்றும் மூலக்கூறு உயிரியலில் பயன்படுத்தலாம்;உயர்தரம், கன்னி பிபி பொருள்;சான்றளிக்கப்பட்ட DNase, RNase, DNA, PCR தடுப்பான்கள் மற்றும் சோதனை செய்யப்பட்ட பைரோஜன் இல்லாதவை.